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羊亞洲I型口蹄疫抗體ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟
更新時(shí)間:2020-03-04   點(diǎn)擊次數(shù):1241次

羊亞洲I型口蹄疫抗體(FMD-I)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟

1.  編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1

孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2.  加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先

加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不

觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復(fù) 5 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

7.  溫育:操作同 3。 

8.  洗滌:操作同 5。

9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.  測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。  測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

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