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PCR檢測(cè)試劑盒使用前后的注意事項(xiàng)
更新時(shí)間:2022-07-26   點(diǎn)擊次數(shù):779次
  PCR檢測(cè)試劑盒使用前后的注意事項(xiàng)
  PCR檢測(cè)試劑盒里分好幾部分,重要的是PCR反應(yīng)體系:DNA聚合酶,鎂離子,引物(測(cè)2個(gè)基因和1個(gè)內(nèi)標(biāo)需要3對(duì)引物),探針(也要3對(duì)探針,發(fā)出三種波長(zhǎng)的熒光),逆轉(zhuǎn)錄酶,dNTP(ATUCG會(huì)用部分U代替T),還有用于抗干擾的UDG酶(正常的DNA只有ATCG,PCR擴(kuò)增出來的DNA會(huì)有AT(會(huì)用部分U代替T)CG,這樣擴(kuò)增出來的DNA鏈中有U,UDG酶能切斷含U的DNA鏈,所以擴(kuò)增DNA在空氣中形成的氣溶膠,不會(huì)影響其他樣本)、RNA酶抑制劑(空氣中液體里全都是RNA酶,會(huì)降解病毒的RNA)、Taq酶的抗體(Hotstart,常溫下能抑制Taq酶的活性,PCR擴(kuò)增時(shí)高溫讓其失活,Taq酶就在高溫時(shí)恢復(fù)活性開始擴(kuò)增了)。
  一、試劑盒使用注意事項(xiàng)
  (1)所有試劑應(yīng)按照適合溫度儲(chǔ)存。請(qǐng)勿反復(fù)凍融。
 ?。?)使用后均需要對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無酶耗材。
  二、樣本注意事項(xiàng)
  (1)細(xì)胞在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用試劑盒。
 ?。?)擴(kuò)增2kb以內(nèi)片段,細(xì)胞樣品濃度不超過1000個(gè)細(xì)胞。如若擴(kuò)增片段超過2kb,可適當(dāng)提高細(xì)胞濃度。
 ?。?)不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理,防止交叉污染導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏差。
  三、試劑盒使用過程中注意事項(xiàng)
 ?。?)PCR過程中推薦使用陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。
 ?。?)整個(gè)過程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中,防止形成環(huán)境污染。
 ?。?)PCR產(chǎn)物3’末端含有A,可直接進(jìn)行TA克隆。
  四、試劑盒使用后注意事項(xiàng)
 ?。?)PCR反應(yīng)完成后,嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開蓋。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,防止氣溶膠污染。
  (2)為防止試劑盒污染,請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。
 

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